云顶国际- 云顶赌场- 娱乐城暂养海捕日本蟳“牛奶病”病原初步研究pdf

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　　近年来，舟山暂养的海捕日本蟳连续发生规模性死亡事件，病蟹的血淋巴液呈乳白色牛奶状，与先前报道的梭子蟹“牛奶病”症状相似。为探索日本蟳“牛奶病”的病因，本论文从病理观察、病原分离鉴定、免疫指标检测等方面对日本蟳“牛奶病”展开研究，结果如下临床症状和组织病理观察①发病的日本蟳摄食停止、行动迟缓，打开背部甲壳，血淋巴液由正常的蓝青色变为牛奶状乳白色，无法正常凝固②组织病理切片观察发现，病蟹的肝胰腺、鳃、肌肉和心肌组织都发生了不同程度的病变，具体表现为细胞肿胀、变性甚至坏死，部分细胞的细胞核固缩、碎裂或溶解消失，基膜破裂，细胞界限模糊③电镜观察在病蟹的血淋巴液、肝胰腺、鳃、心脏等组织中均存在大量杆状病毒，直径大小约200300NM，形状类似白斑病毒。将通过密度梯度离心从病蟹血淋巴液中分离提纯到的病毒，电镜负染也可见相似的杆状病毒。病原分离鉴定①显微观察未见明显的寄生虫感染②细菌分离病蟹血淋巴液及肝胰腺在细菌培养板TSA及TCBS划线培养，未分离到优势菌群③PCR检测提取病蟹组织DNA样本以及通过密度梯度离心获得的纯化病毒，用3对WSSV特异性引物进行PCR检测，结果呈阳性④WESTERNBLOT反应将血淋巴液进行PAGE电泳，用WSSV特异性抗体进行WESTERNBLOT检测，可见特异性的免疫条带。⑤回感试验将病蟹血淋巴液处理后注射健康蟹，可导致健康蟹发病死亡，且死亡率与感染液浓度呈正相关，人工感染的病死蟹未复制出“牛奶”症状，但均可检出WSSV。病蟹免疫指标检测对患病日本蟳与正常日本蟳肌肉组织和肝胰腺中的常规免疫指标作检测，发现病蟹肌肉中的酸性磷酸酶ACP、碱性磷酸酶AKP、总超氧化物歧化酶TSOD、过氧化物酶POD活性均比正常蟹高，而总抗氧化能力TAOC的检测结果则显示，抽取的12个病蟹样本中，有3个病蟹的TAOC值较正常蟹低，其余9个病蟹的TAOC值均高于正常蟹。试验结果说明，病蟹体内多种免疫相关酶活相比健康蟹均有不同程度的提高，证实病原入侵引发了蟹体内的免疫应激反应。本研究通过临床观察、组织切片、超微病理、PCR扩增、免疫印迹反应等手段，从患“牛奶病”的日本蟳血淋巴液中鉴定到高浓度的WSSV将病蟹乳白色血淋巴液进行注射回感，可以引起健康日本蟳死亡，并在回归感染后的日本蟳血淋巴液中也检测到WSSV的存在，初步推测WSSV与日本蟳患病具有相关性鉴于回归感染后死亡的日本蟳未能复制出“牛奶病”症状，WSSV与日本蟳“牛奶病”症状的相关性尚需进一步证实。

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